Embriyonun endometriuma implantasyonunda Mikrorna200-c’nin rolü

Abstract

İmplantasyon, reseptif uterus ile blastosist arasındaki etkileşimi içeren oldukça kompleks bir süreçtir. Kusurlu implantasyon; infertilite, spontan düşük, preeklamsi gibi olumsuz gebeliklere neden olabilmektedir. Çalışma kapsamında 30 adet dişi sıçan kullanılmış, altışarlı beş gruba ayrılan bu sıçanlardan, dört grupta gebelik oluşturulmuştur. Gebeliğin 4. gününde, gebelik oluşturulan grup2 ve grup3 sıçanların, sağ uterus boynuzlarına miRNA200-c mimiği, sol uterus boynuzlarına fizyolojik salin uygulanmıştır. Gebeliklerinin 8. gününde grup2 ve 13. gününde grup3 sıçanlara servikal dislokasyon yapılarak uterus dokuları alınmış ve embriyoları sayılmıştır. Grup4 ve grup5 gebe sıçanlara herhangi bir uygulama yapılmamıştır. Gebeliklerinin 8. gününde grup4’ün ve 13. gününde grup5’in uterus dokuları, servikal dislokasyon yapılarak alınmış ve embriyoları sayılmıştır. Gebelik oluşturulmayan grup1 sıçanların uterus dokuları, östrus siklusunda servikal dislokasyon yapılarak alınmıştır. Gruplar arasındaki farklılığı belirlemek için embriyo sayıları istatistiksel olarak analiz edilmiştir. Dokular, ışık mikroskop takip yöntemi uygulandıktan sonra parafin bloklardan kesitler alınmıştır. Kesitlere ?5?3 integrin, VEGF, LIF, CD105, Oct3/4, SSEA-1, NANOG, IL-6, IL-18 ekspresyonlarının belirlenmesi amacıyla immunohistokimyasal işlem uygulanmıştır. MiRNA-200c uygulanan gruplardaki embriyo sayılarında, istatistiksel olarak anlamlı azalma olduğu gözlenmiştir. Yapılan immunohistokimyasal analizlerde; CD105’in stromal hücrelerdeki ekspresyonunun miRNA-200c mimiği uygulanan gruplarda azaldığı, ?5?3’ün gruplar arasında farklı olmadığı, IL-6’nın mimik uygulanan grupta bez epitelinde ve stromal hücrelerde ekspresyon görülmediği, IL-18’in mimikli gruplarda azaldığı, LIF’in erken gebelikte azaldığı ve gebeliğin 13. gününde tekrar arttığı görülmüş, mimik uygulanan gruplarda gebeliğin 8. gününde yüksek seviyede ekpresyon gözlemlenmiştir. NANOG ekpresyonunun mimik uygulanan gruplarda stromal hücrelerde arttığı, mimik uygulanmayan erken gebelikte azaldığı ve plasentada arttığı, Oct3/4’ün mimik uygulanan Grup2 ve grup3’te lümen epitelinde ekspresyonun, negatif olduğu görülmüştür. SSEA’nın mimik uygulanan gruplarda arttığı, VEGF’nin mimik uygulanan gruplarda stromal hücrelerde iyice azaldığı bulunmuştur. Elde edilen sonuçlar, miRNA- 200c’nin, implantasyon olayında implante olan embriyo sayılarının üzerinde etkili olduğunu ve implantasyon sürecini etkilediğini göstermektedir.

Implantation is a highly complex process involving the interaction between the receptive uterus and blastocyst. Defective implantation can cause adverse pregnancies such as infertility, spontaneous abortion, and preeclampsia.Thirty female rats were used in this study. The rats were divided into five groups of six and pregnancy was established in four of these groups. miRNA200-c mimic was applied to the right uterine horns and physiological saline was applied to the left uterine horns of the group2 and group3 rats on the 4th day of pregnancy. Uterine tissues were taken by cervical dislocation on the 8th day of the pregnancy in the group2 rats and 13th day of the pregnancy in the group3 rats, and the embryos were counted. No application was applied to the group4 and group5 pregnant rats. Uterine tissues were removed by cervical dislocation on the 8th day of the pregnancy in group4 rats and 13th day of the pregnancy in group5 rats, and the embryos were counted. In nonpregnant rats, uterine tissues were removed by cervical dislocation during estrous cycle. Embryo numbers were statistically analyzed to determine the difference between groups. Sections were taken from the paraffin blocks after the light microscope method was applied to the tissues. An immunohistochemical procedure was applied to the sections to determine the expressions of ?5?3 integrin, VEGF, LIF, CD105, Oct3/4, SSEA-1, NANOG, IL-6, IL-18. A statistically significant decrease was observed in the number of embryos in the miRNA-200c groups. In the immunohistochemical analyzes, it was reported that; the expression of CD105 in stromal cells decreased in miRNA- 200c mimic groups, ?5?3 was not different between groups, IL-6 was not expressed in gland epithelium and stromal cells in the mimic group, IL-18 decreased in mimic groups, LIF decreased in early pregnancy and increased again on the 13th day of pregnancy, and a high level of expression was observed on the 8th day of pregnancy in the mimic groups. It was observed that; NANOG expression increased in stromal cells in mimic groups although it decreased in early pregnancy and increased in placenta in the mimic- free group, and Oct3/4 had negative expression in the lumen epithelium in group2 and group3 in which mimic was applied. It was observed that; SSEA increased in mimic groups, VEGF decreased in stromal cells in mimic groups. These results show that; miRNA-200c has an effect on the number of implanted embryos during the implantation event, and it affects the implantation process.