Yağ dokudan izole edilen kök hücrelerin donör yaşına bağlı mtor aktivitesininin belirlenmesi

Abstract

Canlı organizmalarda yaşlanma, kaçınılmaz fizyolojik bir sonuçtur. Hücresel yaşlanma sadece farklanmasını tamamlamış hücrelerde değil aynı zamanda kök hücrelerde de gerçekleşir. MTOR (Rapamisin protein kompleksinin memeli hedefi) hücre büyümesi ve metabolizmasında önemli role sahiptir. Hücre çoğalmasında önemli rol oynayan mTOR aynı zamanda hücresel yaşlanmayı düzenler ve biyonerjitik altyapıyı yönlendirir. Yağ dokudan elde edilen mezenkimal kök hücrelerin donör yaşına bağlı olarak mTOR ekspresyonun belirlenmesi bu tezin amacıdır. Bu çalışmada grup1 (6 haftalık), grup2 (12 haftalık) ve grup3 (17 aylık) dişi sıçanlardan alınan yağ dokusundan primer explant kültür yöntemi ile mezenkimal kök hücre (MKH) izolasyonu yapıldı. MKH’ler in vitro kültür ortamında çoğaltıldı. Flow sitometri ile tiplendirmesi yapılan kök hücrelerde mTOR aktivitesi (mTORC1 ve mTORC2) için qPCR yöntemiyle belirlendi. Aynı zamanda apoptotik belirteçlerden kaspaz9,8,3, BAX ve Bcl-2 ekspresyonlarıda qPCR yöntemiyle değerlendirildi. Çalışmamızda apoptotik belirteçlerin en yüksek ekspreyonun grup1’de en düşük ekpresyonunun ise grup2’de olduğu saptandı. MTOR ekspresyonu değerlendirildiğinde ise MTORC1 en yüksek grup2’de en düşük ise grup1’de bulundu. MTORC2 grup 2 ve grup3 te birbirine yakın ekspresyon gösteriken grup1’deki mTORC2 ekspresyonun diğer gruplara oranla düşük olduğu belirlendi. Bu çalışmada hem mTORC1’in hem de mTORC2’nin kök hücrelerde donor yaşına bağlı olarak farklı eksprese olduğunu bulduk. Bu farklılığın işlevsel sonuçlarının daha iyi anlaşılabilmesi için ileri düzey araştırmalara gereksinim vardır.

Aging in living organisms is an inevitable physiological consequence. Cellular senescence occurs not only in cells that have completed their differentiation, but also in stem cells. MTOR (mammalian target of Rapamycin protein complex) has an important role in cell growth and metabolism. mTOR, which plays an important role in cell proliferation, also regulates cellular aging and directs the bionergetic infrastructure. The aim of this thesis is to determine the mTOR expression of mesenchymal stem cells obtained from adipose tissue depending on the donor age. In this study, mesenchymal stem cell (MSC) isolation was performed by primary explant culture method from adipose tissue taken from group1 (6 weeks), group2 (12 weeks) and group3 (17 months) female rats. MSCs were grown in in vitro culture medium. mTOR activity (mTORC1 and mTORC2) in stem cells typified by flow cytometry was determined by qPCR method. At the same time, caspase9,8,3, BAX and Bcl-2 expressions, which are apoptotic markers, were evaluated by qPCR method. In our study, it was determined that the highest expression of apoptotic markers was in group1 and the lowest expression was in group2. When MTOR expression was evaluated, MTORC1 was found to be highest in group 2 and lowest in group 1. It was determined that mTORC2 expression in group 2 and group 3 was close to each other, while mTORC2 expression in group 1 was lower than in other groups. In this study, we found that both mTORC1 and mTORC2 are differentially expressed in stem cells depending on donor age. Further studies are needed to better understand the functional consequences of this difference.