Sığır karaciğer ve akciğer glutatyon s-transferaz enzimlerinin bazı biyokimyasal özellikleri

Abstract

Glutatyon S-Transferazlar (GST'ler), bir çok elektrofîlik madde ile glutatyon (GSH) konjugasyonunu kataliz eden çok fonksiyonlu izozimler grubudur. Bu çalışmada, sığır karaciğer ve akciğer GST'leri l-kloro-2,4-dinitrobenzen (CDNB) model substratı kullanılarak karakterize edilmiştir. Sığır karaciğerinde CDNB 'ye karşı GST akti vitesi 100 fig protein miktarına ve 150 saniye reaksiyon zamanına kadar lineerlik göstermiştir. Optimum pH ve sıcaklık sırasıyla 10.5 ve 60 °C bulunmuştur. CDNB'nin dinitrofenil glutatyon konjugasyon katalizi, sığır akciğerinde 40 p,g protein miktarına kadar lineerite göstermiş ve reaksiyon 80 saniye boyunca lineer kalmıştır. Akciğer GST aktivitesi için optimum pH ve sıcaklık sırasıyla 10.5 ve 60 °C olarak bulunmuştur. Sığır karaciğer ve akciğer GST aktivitesi üzerine metallerin ve deterjanların etkisi incelenmiş ve divalent ağır metaller ile deterjanların enzim aktivitesini önemli derecede inhibe ettiği bulunmuştur. Bunlar arasında en fazla inhibisyona Hg, Cu, Sb, Zn ve Cd gibi metaller ve sodyum dodesil sülfat (SDS), deoksikolİk asit gibi deterjanlar neden olmuştur. GST'lerin kinetik parametreleri de tayin edilmiş ve sığır karaciğer ve akciğer GST'leri için Km değerleri sırasıyla 3.33 ve 6 mM, Vmax'lan ise 2500 ve 1000 nmol/dak/mg protein olarak bulunmuştur. Anahtar kelimeler: GST, glutatyon S-transferaz, CDNB, l-kloro-2,4-dinitrobenzen, sığır karaciğer ve akciğeri, biyokimyasal özellikler.

The glutathione S-transferases (GST) are a family of multifunctional isoenzymes catalysing the conjugation of glutathione (GSH) to a variety of electrophilic compounds. In this study, bovine liver and lung GSTs were characterized using l-chloro-2,4- dinitrobenzene as a model substrate. Bovine liver GSTs activity toward CDNB were found to be linear up to 100 (o,g protein amount and 150 seconds reaction time. In addition, optimum pH and temperature were detected as 10.5 and 60°C, respectively. Bovine lung GST activities toward CDNB were found to be lineer up to 40 jag protein amount and 80 seconds reaction time. In addition, optimum pH and temperature were determined as 10.5 ve 60°C, respectively. The effects of metals and deterjents on bovine liver and lung GSTs activities were studied and found that divalent heavy metals and ionic detergents inhibited the enzyme activities significantly. Among them the highest degrees of inhibitions were detected with metals such as Hg, Cu, Zn, Sb and Cd and with detergents such as sodium dodecyl sulfate, deoxycholic acid. Furthermore, kinetic parameteres of liver and lung GSTs were measured and Km values were found 3,33 and 6 mM respectively. Vmax values for liver and lung GSTs were found as 2500 and 1000 nmol/dak/mg protein, respectively. Key wordsrGST, glutathione S-transferase, CDNB, l-chloro-2,4-dinitrobenzene, bovine liver and lung, biochemical properties. VI