Please use this identifier to cite or link to this item:
https://hdl.handle.net/11499/45738
Title: | SKOV-3 ovarian adenokarsinoma hücre hattında, alfa lipoik asit uygulanmasının epitelyal mezenkimal geçiş ve migrasyon üzerine etkisi | Other Titles: | The effect on epithelial mesenchimal transition and migration of applying alpha lipoic acid in SKOV-3 ovarian adenocarcinoma cell line | Authors: | Önder, Elif | Advisors: | Mete, Gülçin | Keywords: | metastas EMT transcriptional factor E-cadherin vimentin TGF ß1 metastaz EMT transkripsiyonel faktörler E-kadherin vimentin TGF ß1 |
Publisher: | Pamukkale Üniversitesi Tıp Fakültesi | Abstract: | Kadınlarda kansere bağlı ölümlerin beşinci önde gelen nedeni over kanseridir. Etkili bir tarama yöntemi olmadığından ve semptomları belirsiz olduğundan, epitelyal over kanseri (EOK)'nin erken tespiti zordur. Bu yüzden, genellikle hastalar ileri evrede tümör metastazı mevcutken teşhis edilir. Başlıca transçölomik yol vasıtasıyla metastaz yapan EOK hücreleri, epitelden mezenkime geçiş (EMT) ile primer EOK?den diğer bölgelere yayılır. Doğal bir antioksidan lipofilik bileşik olan alfa lipoik asit (ALA), kanserli hücreler tarafından biriktirilen oksidatif stresi, kanser hücrelerinde apoptoza ve hücre proliferasyon inhibisyonuna yol açarak azaltır. Çalışmamızın amacı over kanserinin en sık görülen tipi olan epitelyal alt tipinden bir hücre hattı olan SKOV-3 ovarian adenokarsinoma hücre hattında dönüştürücü büyüme faktörü ß (TGF ß) bağımlı EMT?nin kurulması, ALA antioksidan bileşiğinin IC 50 dozunun uygulanmasının 2D (monolayer) hücre kültürleri yapılarak ALA?nın EMT ve over kanseri migrasyonununa etkisini araştırmaktır. Çalışmamızda SKOV-3 hücrelerinde EMT modeli kurmak için TGF ß1 dozu, RT-PCR sonucunda en uygun gen ekspresyonlarını sağladığımız doza göre, ALA IC 50 dozu ise XTT hücre canlılığı kiti kullanarak belirlendi. Kontrol, TGF ß, ALA ve ALA+TGF ß olmak üzere dört farklı grup oluşturuldu, EMT belirteçleri olan E-kadherin, vimentin, Snail, Slug, Twist ve Zeb, RT-PCR ile gen düzeyinde ölçüldü, immünsitokimya yöntemiyle de bu belirteçler protein düzeyinde ölçülerek çalışmamız desteklendi. Yine her grup için ayrı ayrı migrasyon ve proliferasyonu göstermek için wound healing, invazyon kapasitasyonunu değerlendirmek için matrigel invazyon testi, kolonileşmeyi göstermek için kolonizasyon deneyi yapıldı. Deney sonuçlarına göre TGF ß dozu 100/ng/ml ve 72 saat olarak, ALA IC 50 dozu 48. saat ve 219,033 ?M olarak belirlendi. RT- PCR sonuçlarına göre TGF- ß grubunda EMT belirteçleri EMT ile uyumlu olup, ALA verilen gruplarda EMT?yi inhibe ettiği gösterildi. Bu belirteçleri protein düzeyinde göstermek için yapılan immünsitokimya sonuçları RT-PCR sonuçlarıyla uyumlu bulundu. Yine yapılan wound healing ve invazyon deneylerine göre TGF ß grubunda proliferasyon ve invazyon artarken, ALA uygulanan ve kombine gruplarda azaldı. Tüm bu bulgular ışığında TGF ß1 uygulayarak EMT modeli kurduğumuz ve daha invaziv ve proliferatif hale getirdiğimiz SKOV-3 hücrelerinde, ALA uygulayarak proliferasyon, migrasyon ve invazyonun engellendiğini hem gen düzeyinde hem de morfolojik olarak gösterdik. Bu çalışmanın sonuçları, ALA?nın over kanserinin proliferasyon, invazyon ve metastazının önlenmesi için umut verici bir terapötik ajan olabileceğini düşündürmektedir. Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer-related death in women. Because of there is no effective screening method and its symptoms are unclear, early diagnosis of epıthelial over cancer (EOC) is difficult. Therefore, patients are usually diagnosed with advanced tumor metastases. EOC cells primarily metastasize via the transcoelomic pathway. It spreads from primary tumor by undergoing epithelial mesenchymal transition (EMT). It has been suggested that alpha lipoic acid (ALA), a natural antioxidant lipophilic compound, reduces the oxidative stress by causing apoptosis and inhibition of proliferation of cell in cancer cells. The aim of our study was to establish a transforming growth factor ß (TGF ß) dependent EMT model in the SKOV-3 ovarian adenocarcinoma cell line which is from the epithelial subtype of ovarian cancer and to investigate the effects of applying IC 50 dose of alpha lipoic acid on epithelial mesenchymal transcytosis and ovarian cancer migration. In our study for establish an EMT model in SKOV-3 cells, we determined the TGF ß1 dose by RT-PCR and used XTT cell viability kit to determine IC 50 dose of alpha lipoic acid. We created four different groups that are control, TGF ß, ALA and ALA+TGF ß and analyzed the EMT markers which are E-cadherin, vimentin, Snail, Slug, Twist and Zeb, at the gene level by RT-PCR. After that we determined these markers at the protein level with the immunocytochemistry method. The migration capacities of SKOV-3 cell were assessed by wound healing assey. We used matrigel invasion capacity test to show invasion and a colonization test to show colonization for each group. According to the test results, the TGF ß1 dose was determined as 100/ng/ml and 72 hours, and the ALA IC 50 dose as 48 hours and 219,033 ?M. According to the RT-PCR results, EMT markers in the TGF-ß group were compatible with EMT, and it was shown to inhibit EMT in the groups given ALA. The results of immunocytochemistry to show these markers at the protein level are compatible with RT-PCR results. Again, according to wound healing, colonization and invasion experiments, proliferation and invasion increased in TGF ß group, but decreased in ALA and combined groups. According to all these findings, we have shown that proliferation, migration and invasion are inhibited both at the gene level and morphologically by applying ALA in SKOV-3 cells, which we established an EMT model and made more invasive and proliferative by applying TGF ß1. These results indicate that ALA suppresses the metastasis of ovarian cancer cells by regulating EMT, implying that ALA might be a potential therapeutic agent for the treatment of ovarian cancer. |
Description: | Bu çalışma Pamukkale Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Koordinasyon biriminin 15-03-2021 tarih ve 2021TIPF006 nolu kararı ile desteklenmiştir. | URI: | https://hdl.handle.net/11499/45738 |
Appears in Collections: | Tıp Fakültesi Tez Koleskiyonu |
Files in This Item:
File | Description | Size | Format | |
---|---|---|---|---|
Elif Önder.pdf | 2.85 MB | Adobe PDF | View/Open |
CORE Recommender
Page view(s)
490
checked on Aug 9, 2024
Download(s)
358
checked on Aug 9, 2024
Google ScholarTM
Check
Items in GCRIS Repository are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.