Klebsiella pneumoniae suşlarında CTX-M beta laktamazların fenotipik ve molekuler tanımlanması

Abstract

Genislemis Spektrumlu Beta-Laktamaz (GSBL) üretimi, 1980'li yıllardan beri genisspektrumlu sefalosporinlerin gram negatif bakterilerin sebep oldugu infeksiyonlarda yaygınbiçimde kullanımı sonucu ortaya çıkmıs, sayı ve çesit yönünden hızla artarak tüm dünyadaözellikle hastanelerde önemli bir sorun haline gelmistir.Bu çalısmada, Pamukkale Üniversitesi Arastırma ve Uygulama Merkezi Mikrobiyolojilaboratuvarına gönderilen, çesitli klinik örneklerden izole edilen 217 Klebsiella pneumoniaesusunda GSBL varlıgı arastırıldı. GSBL üretimi, çift disk sinerji testi ve E-test yöntemi iledegerlendirildi. GSBL pozitif suslarda PCR ile CTX-M genleri ve CTX-M pozitif tesbitedilenlerde CTX-M grubu arastırıldı.Klebsiella pneumoniae suslarının 87'sinde (%40.1) GSBL bulunmustur. ki yöntemintutarlılık analizlerinde ise istatistiksel olarak birbirleriyle uyumlu oldugu görülmüstür.Antibiyotik duyarlılık deneyleri CLSI'e göre disk difüzyon yöntemi ile yapılmıstır.mipeneme dirençli sus bulunmamıstır. mipenemden sonra en etkili antibiyotiginciprofloksasin (%81.6) ve amikasin (%74.7) oldugu bulunmustur. GSBL üreten izolatlarındirenç oranları, GSBL üretmeyenlere göre istatistiksel olarak anlamlı derecede daha yüksekbulunmustur (p<0.05). CTX-M genlerine spesifik primerler kullanılarak PCR yapılmıstır. 19susun (% 22.9) CTX-M grup-1 tasıdıgı bulunmustur. RAPD-PCR ile Klebsiella pneumoniaesuslarında 11 grup belirlenmistir.Sonuç olarak, GSBL tespitinde, rutin antibiyogramlarda disk dizilimleri degistirilerekuygulanan ÇDST, ucuz ve güvenilir bir yöntem olarak degerlendirilmistir. Hastaneinfeksiyonları ile etkili bir mücadele için, GSBL sıklıgının arastırılması ve klinisyenlerindogru antibiyotige yönlendirilmesi en önemli önlemlerden biri olacaktır.Anahtar kelimeler: Antibiyotik direnci, Gram negatif basil, GSBL üretimi,K.pneumoniae, PCR, RAPD-PCR

Production of Extended Spectrum Beta-Lactamases (ESBL) have been existed due tofrequent usage of the ?extended spectrum? cephalosporins at the infections caused by gramnegative bacteria, count and types of ESBL increased all over the world and became animportant problem.The existence of the ESBL has been investigated in 217 Klebsiella pneumoniae strainsisolated from different clinical specimens sent from Research and Training of PamukkaleUniversity. The existence of the ESBL has been investigated by double disk synergy test andE-test. By using PCR methods CTX-M genes were investigated in the ESBL positive strains.After determining CTX-M genes, CTX-M group1 primers were studied.The presence of ESBL has been observed at 87 (40.1%) of the Klebsiella pneumoniaestrains. Two methods were statistically consistent. Antimicrobial susceptibility tests wereperformed by disc diffusion method described in CLSI guide. According to antimicrobialsusceptibility test results, resistance to imipenem was not detected. Except imipenem,ciprofloksasin (81.6 %) and amikacin (74.7 %) was the most effective antibiotic against tothe strains. Furthermore, ESBL positive strains were found resistant to antibiotics than ESBLnegative strains (p<0.005). A polimerase chain reaction (PCR) was performed by spesificprimers for the CTX-M genes. Among the 87 isolates, rates of CTX-M beta lactamases werefound 22.9 %. Eleven groups for K.pneumoniae were seperated with by RAPD-PCR.As a result, for ESBL detection; double disc synergy test is simple and sensitive. In themeasure of the hospital diseases it is important to investigation the frequency of ESBL andguide clinicians to the correct antibiotics.Key words: Antibiotic resistance, Gram negative rod, ESBL production, K.pneumoniae,PCR, RAPD-PCR