Trehaloz' un pterjium dokusundaki fibroblastların üzerine inhibitör etkisinin araştırılması

Abstract

Pterjium şimdiye kadar yapılan çalışmalarla etyolojisi tam olarak aydınlatılamamış, birçok hipotez ortaya konan ancak patogenezinde fibroblast proliferasyonun olduğu dejeneratif bir oküler yüzey bozukluğudur. Tedavisi için genellikle cerrahi eksizyon tercih edilir. Biz çalışmamızda trehalozun fibroblastlar üzerindeki inhibitör etkisini invitro koşullarda incelemek istedik ve bunu hangi hücresel yolaklarla ve hangi genler üzerinden yaptığını analiz etmeyi amaçladık. Kliniğimize başvuran 3 erkek ve 3 kadın toplamda 6 primer pterjiumlu hastayı çalışmamıza dahil ettik. Önce bu hastaların pterjium ve normal konjontivalarını eksize edilip primer hücre kültür yapıldı. Trehaloz(100, 200, 400, 600 mM) ve mitomisin C(0,5, 1, 2,5 ,5 ,10 ve 20 μl) muamelesi gerçekleştirildi ve 48 saat boyunca 37oC'de %5 CO2 ve %95 nemli ortamda inkübe edildi. Bu aşamada trehalozun fibroblastların proliferasyonunu inhibe ettiğini gözlemledik. Geneall marka Hybrid-R total RNA izolasyon kiti aracılığıyla ilaç muamele edilmeyen kontrol ve trehaloz, mitomisin C uygulanan pterjium ve konjonktiva hücrelerinin total RNA izolasyonu gerçekleştirildi. Sonrasında bu örneklerden ikisi mikrodizin analizine gönderildi. Pterjiumda normal konjonktivaya oranla ifadesi değişen VIM, FGF7, FGF10, TGFBR2, TGBR3 MSMO1, Tenascin C, RANBP3L, NR4A1, IGFBP4, CLCA2, SERPIN2,ASPN genleri olarak saptadık. Trehaloz verildiğinde bu genlerdeki değişimler dikkat çekiciydi. Bu genler genel olarak vaskülogenezis, migrasyon, yara iyileşmesi, adezyon, fibroblast proliferasyonu, fibroblast büyüme faktörünün pozitif regülasyonu gibi olaylarda görev alıyorlar ve trehaloz verildiğinde bu genlerin ifadesi pterjium oluşumunu bloke edecek yönde değişti. Ancak çalışmamızda kısıtlı hasta sayısı mevcut olduğundan daha geniş hasta gruplarına ihtiyaç mevcuttur.

Pterygium is a degenerative ocular surface disorder, the etiology of which has not been fully elucidated by studies, many hypotheses have been put forward, but in the pathogenesis of fibroblast proliferation. Surgical excision is generally preferred for its treatment. In our study, we aimed to examine the inhibitory effect of trehalose on fibroblasts in vitro and we aimed to analyze which cellular pathways and through which genes it does this. We included a total of 6 patients with primary pterygium, 3 male and 3 female, who applied to our clinic. First, the pterygium and normal conjunctiva of these patients were excised, and primary cell culture was performed. Trehalose(100, 200, 400, 600 mM) and mitomycin C(0.5, 1, 2.5, 5, 10 and 20 μl) were treated and incubated for 48 hours at 37oC in 5% CO2 and 95% humidity was done. At this stage, we observed that trehalose inhibited the proliferation of fibroblasts. Total RNA isolation of drug-free control and trehalose, mitomycin C-treated pterygium and conjunctival cells were performed using Geneall brand Hybrid-R total RNA isolation kit. Two of these samples were then sent for microarray analysis. We detected VIM, FGF7, FGF10, TGFBR2, TGBR3 MSMO1, Tenascin C, RANBP3L, NR4A1, IGFBP4, CLCA2, SERPIN2, ASPN genes is change in pterygium compared to normal conjunctiva. Changes in these genes were striking when trehalose was given. These genes are generally involved in events such as vasculogenesis, migration, wound healing, adhesion, fibroblast proliferation, positive regulation of fibroblast growth factor, and when trehalose was given, the expression of these genes changed to block the formation of pterygium. However, since the number of patients was limited in our study, larger patient groups are needed.